Аннотация к проекту № 18-29-07089 (РФФИ)

Технология геномного редактирования CRISPR/Cas9 в сочетании с методом соматического клонирования имеет широкие перспективы применения для решения задач, направленных на создание новых генотипов с измененным хозяйственно-полезными признаками. В частности, получение клонированных эмбрионов с использованием фетальных фибробластов редактированных в направлении нокаута гена β-лактоглобулина и их трасплантация животным-реципиентам ожидаемо позволит получить коров способных производить молоко с пониженными аллергенными свойствами. Однако в мировой практике эффективность соматического клонирования с точки зрения получения редактированных эмбрионов высокого качества остается низкой, высока частота аномального эмбрионального развития, а рожденное потомство менее жизнеспособно, что сдерживает внедрение данной технологии в практическое животноводство. Основными лимитирующими факторами являются качество ооцитов-источников цитопластов и их способность к дальнейшему развитию, приобретаемые в процессе созревания in vitro. Эти свойства яйцеклеток в высокой степени зависят от состава системы культивирования и поэтому являются объектом направленного воздействия. При этом целенаправленный поиск физиологически уместных биологически активных веществ, способных специфически воздействовать на ооцит, повышая или поддерживая его жизнеспособность и компетенцию к эмбриональному развитию, признается во всем мире наиболее перспективным и целесообразным способом решения проблемы. В этой связи в рамках выполнения представленного проекта ставится задача охарактеризовать роль экзогенных ростовых и гормональных факторов, а на этапе созревания ооцитов in vitro, а также эндогенного белка, связывающего элемент цитоплазматического полиаденилирования на этапе одноклеточного эмбриона. В целом планируемый комплексный сравнительный анализ как краткосрочных (в ооцитах), так и долгосрочных (в эмбрионах) эффектов позволит оценить биологическую уместность и целесообразность использования исследуемых факторов для повышения качества клонированных эмбрионов крупного рогатого скота с нокаутом гена β-лактоглобулина и их жизнеспособности после трансплантации животным-реципиентам.